- 黄倩;梁安健;朱鹏程;李东亮;唐俊妮;
淀粉酶广泛存在于动物、植物、微生物中,魏斯氏菌具有高产淀粉酶的能力,本研究拟从实验室前期分离的3株魏斯氏菌中通过淀粉圈水解法筛选出一株高产淀粉酶的菌株W.confusa C13,测定其基本生物学特征,并通过单因素试验、PB试验、半陡爬坡试验和响应面对菌株的产酶条件进行优化.研究确定了碳源比例、pH、接种量是影响菌株产淀粉酶活力最显著的三个因素(P<0.05),通过响应面得到最佳酶条件为脱脂奶粉:蔗糖为4.76∶1、pH 8.07、接种量5.79%、豆粕:酵母粉为3∶1、NaCl浓度为3%、发酵温度35℃、发酵时间24 h.在该条件下淀粉酶活力可达105.48 U/mL,比未优化酶活提升了103.43%,优化效果显著(P<0.05),且在该条件下模型预测值和真实值基本吻合(相对误差为3.5%),为乳酸菌所产的淀粉酶的开发和利用提供了新的研究思路.
2024年01期 v.50;No.221 16-27页 [查看摘要][在线阅读][下载 1739K] [下载次数:209 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ] - 李志斌;许晴;李瑞文;王永;李艳艳;朱江江;王友利;林亚秋;
旨在克隆山羊KLF8基因序列,阐明组织表达特性,并初步揭示过表达KLF8后对山羊肌内前体脂肪细胞增殖的潜在影响.利用逆转录PCR(reverse transcription-polymerase chain reaction, RT-PCR)方法克隆获得山羊KLF8基因启动子和CDS区序列(coding sequence,CDS),并运用生物信息学方法分析其序列特征;利用基因重组方法构建山羊pcDNA3.1-KLF8真核过表达载体,利用CCK-8、EdU检测方法和实时荧光定量PCR(real-time quantitative PCR,qPCR)明确KLF8对山羊肌内前体脂肪细胞增殖的影响.结果显示,获得包含2个潜在的核心启动子、多个TATA-Box和GATA-Box的山羊KLF8基因启动子2 001bp和包含KLF家族典型的锌指结构域、发挥转录抑制/激活基序的CDS序列1 062 bp.KLF8高表达于山羊脾脏组织,极显著高于其他组织(P<0.01),中度表达于肾脏和肺脏组织,低表达于背最长肌和股二头肌.过表达KLF8抑制山羊肌内前体脂肪细胞增殖,并且这种作用可能是通过上调CCND1的表达来实现的.结果为明确山羊KLF8基因生物学特征及对山羊肌内前体脂肪细胞增殖的影响提供重要的数据支撑.
2024年01期 v.50;No.221 28-38页 [查看摘要][在线阅读][下载 2275K] [下载次数:87 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:3 ] - 廖焕杰;黄林;金素钰;郑玉才;
为建立从乳中提取RNA并扩增基因的方法,从4头麦洼牦牛混合乳中用超速离心法初步分离外泌体后,用TRIzol法提取其中的总RNA,经反转录后用PCR技术扩增乳腺上皮细胞3个特异基因的编码区序列并直接测序.结果显示,乳中提取的RNA质量较好,可以扩出κ-酪蛋白基因和β-乳球蛋白基因的完整编码区,长度分别为705 bp和636 bp,产物可直接测序,但未能扩增出乳铁蛋白基因.此外,本试验初步表明,从牦牛乳中提取RNA用于PCR扩增基因时,其循环数应在35循环到45循环之间.本研究建立了利用牦牛乳中外泌体提取RNA的新方法,提取的RNA可用于扩增基因和测序.
2024年01期 v.50;No.221 39-43页 [查看摘要][在线阅读][下载 1109K] [下载次数:74 ] |[网刊下载次数:0 ] |[引用频次:0 ] |[阅读次数:1 ]